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《Placenta》：多不饱和脂肪酸对转运蛋白的影响
人阅读 发布时间：2019-03-12 09:21
【目的】多不饱和脂肪酸（PUFAs），包括抗坏血酸（AA）、二十碳五烯酸（EPA）和二十二碳六烯酸（DHA），对胎儿的生长是必不可少的。本研究的目的是阐明 PUFAs 对胎盘转运体表达和功能的影响，胎盘转运体在胎盘功能中起着重要作用，包括向胎儿提供营养、排泄代谢物和保护胎儿免受外源性物质的侵害。
【方法】用人胎盘绒毛膜癌细胞（BeWo Cell）作为滋养层模型。用 PCR 芯片研究了多不饱和脂肪酸（PUFAs）诱导的 84 个转运蛋白基因表达的变化。转运蛋白的蛋白质表达水平和活性分别通过免疫印迹（Western Blotting）和吸收实验进行评估。最后用妊娠的 Wistar 大鼠分析胎盘转运蛋白的表达。
【结果】PUFAs（AA、EPA 和 DHA）增加了介导细胞对胱氨酸/谷氨酸的摄取的转运蛋白 xCT/SLC7A11，该转运蛋白介导了细胞对胱氨酸的摄取，同时也介导了 BeWo 细胞中谷氨酸的排出。这些 PUFAs 也增加了 BeWo 细胞对 [14c] 胱氨酸的吸收。NRF2 敲除并未阻断 PUFAs 诱导的 xCT/SLC7A11 基因的 mRNA 表达。RT-PCR 分析表明，妊娠 12 天的胎盘中 xCT/SLC7A11 基因的表达水平高于妊娠 20 天的。
【结论】这些结果表明，PUFAs 通过诱导 xCT/SLC7A11 的表达促进胎盘细胞中胱氨酸的摄取，而 NRF2 不参与 PUFAs对xCT/SLC7A11 的作用。此外，在妊娠期间 xCT 在大鼠胎盘中的表达可能变化。
文献：
Analysis of the effects of polyunsaturated fatty acids on transporter expressions using a PCR array: Induction of xCT/SLC7A11 in human placental BeWo cells
https://doi.org/10.1016/j.placenta.2018.11.010
【方法】用人胎盘绒毛膜癌细胞（BeWo Cell）作为滋养层模型。用 PCR 芯片研究了多不饱和脂肪酸（PUFAs）诱导的 84 个转运蛋白基因表达的变化。转运蛋白的蛋白质表达水平和活性分别通过免疫印迹（Western Blotting）和吸收实验进行评估。最后用妊娠的 Wistar 大鼠分析胎盘转运蛋白的表达。
【结果】PUFAs（AA、EPA 和 DHA）增加了介导细胞对胱氨酸/谷氨酸的摄取的转运蛋白 xCT/SLC7A11，该转运蛋白介导了细胞对胱氨酸的摄取，同时也介导了 BeWo 细胞中谷氨酸的排出。这些 PUFAs 也增加了 BeWo 细胞对 [14c] 胱氨酸的吸收。NRF2 敲除并未阻断 PUFAs 诱导的 xCT/SLC7A11 基因的 mRNA 表达。RT-PCR 分析表明，妊娠 12 天的胎盘中 xCT/SLC7A11 基因的表达水平高于妊娠 20 天的。
图 1.PCR 芯片分析 AA 和 EPA 对转运蛋白表达的影响。（A）BeWo 细胞（对照样品）的 CT 值分布。（B 和 C）用 100 μM AA 或 EPA 处理 BeWo 细胞 24 小时。散点图显示对照组中每个基因的表达水平（2−Δct）与实验样品 AA（B）或 EPA（C）的差异。每个点代表三个独立实验的平均值。粗线表示基因表达的 3 倍变化。
图 2. PUFAs 对 xCT/SLC7A11 表达和功能的影响。（A）用 100 μM 的 AA、EPA 或 DHA 处理 BeWo 细胞 24 小时，处理后用 RT-PCR 检测 xCT 的表达。每列表示三个独立实验的平均值和 SD 值。与对照组相比，*P<0.05，**P<0.01。PUFAs 之间比较，†P<0.05，††P<0.01。（B）用 PUFAs 处理的 BeWo 细胞的蛋白质印迹。每一列代表五个独立实验的平均值和 SD 值。显示有代表性的图像数据。与对照组相比，p<0.01。（c）用 PUFAs 处理后，研究了 [14c]-胱氨酸的摄取活性。用含有 [14c]-胱氨酸（0.1 μCi/m）的无钠转运缓冲液培养 BeWo 细胞 10 分钟。每列表示三个独立实验的平均值和SD值。与对照组相比，*P<0.05，**P<0.01。PUFAs 之间比较，†P<0.05，††P<0.01。
图 3. NRF2siRNA 干扰对 PUFAs 诱导的 xCT 变化的影响。用阴性对照 siRNA 或 NRF2siRNA（hss107130）转染 BeWo 细胞 72 小时，然后用 PUFAs 处理 24 小时，用 RT-PCR 评价 BeWo 细胞的基因表达（A）NRF2，（b）HO-1 和（c）xCT。每一列表示三到四个独立实验的平均值和 SD 值。与对照组相比，*P<0.05，**P<0.01。PUFAs 之间比较，†P<0.05，††P<0.01。
【结论】这些结果表明，PUFAs 通过诱导 xCT/SLC7A11 的表达促进胎盘细胞中胱氨酸的摄取，而 NRF2 不参与 PUFAs对xCT/SLC7A11 的作用。此外，在妊娠期间 xCT 在大鼠胎盘中的表达可能变化。
文献：
Analysis of the effects of polyunsaturated fatty acids on transporter expressions using a PCR array: Induction of xCT/SLC7A11 in human placental BeWo cells
https://doi.org/10.1016/j.placenta.2018.11.010
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