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《Placenta》:多不饱和脂肪酸对转运蛋白的影响

发布时间:2019-03-12 09:21 |  点击次数:

【目的】多不饱和脂肪酸(PUFAs),包括抗坏血酸(AA)、二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA),对胎儿的生长是必不可少的。本研究的目的是阐明 PUFAs 对胎盘转运体表达和功能的影响,胎盘转运体在胎盘功能中起着重要作用,包括向胎儿提供营养、排泄代谢物和保护胎儿免受外源性物质的侵害。

【方法】用人胎盘绒毛膜癌细胞(BeWo Cell)作为滋养层模型。用 PCR 芯片研究了多不饱和脂肪酸(PUFAs)诱导的 84 个转运蛋白基因表达的变化。转运蛋白的蛋白质表达水平和活性分别通过免疫印迹(Western Blotting)和吸收实验进行评估。最后用妊娠的 Wistar 大鼠分析胎盘转运蛋白的表达。

【结果】PUFAs(AA、EPA 和 DHA)增加了介导细胞对胱氨酸/谷氨酸的摄取的转运蛋白 xCT/SLC7A11,该转运蛋白介导了细胞对胱氨酸的摄取,同时也介导了 BeWo 细胞中谷氨酸的排出。这些 PUFAs 也增加了 BeWo 细胞对 [14c] 胱氨酸的吸收。NRF2 敲除并未阻断 PUFAs 诱导的 xCT/SLC7A11 基因的 mRNA 表达。RT-PCR 分析表明,妊娠 12 天的胎盘中 xCT/SLC7A11 基因的表达水平高于妊娠 20 天的。
 

图 1.PCR 芯片分析 AA 和 EPA 对转运蛋白表达的影响。(A)BeWo 细胞(对照样品)的 CT 值分布。(B 和 C)用 100 μM AA 或 EPA 处理 BeWo 细胞 24 小时。散点图显示对照组中每个基因的表达水平(2−Δct)与实验样品 AA(B)或 EPA(C)的差异。每个点代表三个独立实验的平均值。粗线表示基因表达的 3 倍变化。
 
图 2. PUFAs 对 xCT/SLC7A11 表达和功能的影响。(A)用 100 μM 的 AA、EPA 或 DHA 处理 BeWo 细胞 24 小时,处理后用 RT-PCR 检测 xCT 的表达。每列表示三个独立实验的平均值和 SD 值。与对照组相比,*P<0.05,**P<0.01。PUFAs 之间比较,†P<0.05,††P<0.01。(B)用 PUFAs 处理的 BeWo 细胞的蛋白质印迹。每一列代表五个独立实验的平均值和 SD 值。显示有代表性的图像数据。与对照组相比,p<0.01。(c)用 PUFAs 处理后,研究了 [14c]-胱氨酸的摄取活性。用含有 [14c]-胱氨酸(0.1 μCi/m)的无钠转运缓冲液培养 BeWo 细胞 10 分钟。每列表示三个独立实验的平均值和SD值。与对照组相比,*P<0.05,**P<0.01。PUFAs 之间比较,†P<0.05,††P<0.01。
 
图 3. NRF2siRNA 干扰对 PUFAs 诱导的 xCT 变化的影响。用阴性对照 siRNA 或 NRF2siRNA(hss107130)转染 BeWo 细胞 72 小时,然后用 PUFAs 处理 24 小时,用 RT-PCR 评价 BeWo 细胞的基因表达(A)NRF2,(b)HO-1 和(c)xCT。每一列表示三到四个独立实验的平均值和 SD 值。与对照组相比,*P<0.05,**P<0.01。PUFAs 之间比较,†P<0.05,††P<0.01。

【结论】这些结果表明,PUFAs 通过诱导 xCT/SLC7A11 的表达促进胎盘细胞中胱氨酸的摄取,而 NRF2 不参与 PUFAs对xCT/SLC7A11 的作用。此外,在妊娠期间 xCT 在大鼠胎盘中的表达可能变化。

文献:
Analysis of the effects of polyunsaturated fatty acids on transporter expressions using a PCR array: Induction of xCT/SLC7A11 in human placental BeWo cells
https://doi.org/10.1016/j.placenta.2018.11.010